一、準(zhǔn)備工作

 

　　1.環(huán)境要求：將厭氧培養(yǎng)箱放置在干燥、通風(fēng)良好、無(wú)振動(dòng)的地方，確保氣源和電源連接正常。避免周?chē)嬖谝兹家妆锲罚苑腊l(fā)生意外。

 

　　2.清潔與消毒：定期使用適當(dāng)?shù)南緞┣鍧嵟囵B(yǎng)箱內(nèi)外表面，特別是操作臺(tái)、門(mén)把手等高頻接觸區(qū)域。可以使用0.1%苯扎溴銨溶液或2%甲醛液擦拭工作臺(tái)面及可能污染的死角，濕拖地面，保持培養(yǎng)箱的清潔衛(wèi)生。

 

　　3.檢查設(shè)備狀態(tài)：在每次使用前，仔細(xì)檢查儀器的各個(gè)部件是否處于良好的工作狀態(tài)，包括溫度控制器、傳感器、厭氧氣體入口、排氣閥和觀察窗等。確保設(shè)備各項(xiàng)設(shè)施完備，能夠正常運(yùn)行。

 

　　二、操作過(guò)程

 

　　1.形成厭氧環(huán)境：

 

　　-根據(jù)使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內(nèi)放入無(wú)毒塑料袋。

 

　　-開(kāi)啟電源，打開(kāi)溫度控制器，調(diào)節(jié)至所需的培養(yǎng)溫度。

 

　　-向操作室內(nèi)放入鈀粒（封閉）和干燥劑，同時(shí)放入美蘭指示劑（封閉），以監(jiān)測(cè)厭氧環(huán)境的形成。

 

　　-關(guān)緊取樣室內(nèi)外門(mén)，進(jìn)行真空檢查，確保密封性良好。

 

　　-進(jìn)行至少三次的氣體置換，第一次和第二次通常使用氮?dú)猓谌问褂没旌蠚怏w（如N2:H2:CO2=85%:10%:5%），以排除操作室內(nèi)的空氣。

 

　　2.催化脫氧：打開(kāi)鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧。一小時(shí)后打開(kāi)美蘭指示劑觀察其變色情況，以確認(rèn)操作室內(nèi)是否達(dá)到厭氧環(huán)境。

 

　　3.滅菌處理：開(kāi)啟紫外線滅菌燈，對(duì)室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間根據(jù)實(shí)際情況自定，但應(yīng)確保充分滅菌，以減少微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。

 

　　4.菌種置入和培養(yǎng)：

 

　　-檢查并關(guān)閉取樣室的門(mén)，確保密封性。

 

　　-將菌種放入取樣室后，打開(kāi)取樣室外門(mén)并關(guān)閉外門(mén)。取樣室充滿(mǎn)氮?dú)獠⒏鼡Q三次，以確保厭氧條件。

 

　　-接種棒滅菌器的應(yīng)用：使用鎳鉻電熱絲使電極短路以致變紅進(jìn)行滅菌。

 

　　三、注意事項(xiàng)

 

　　1.操作規(guī)范：建立和遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），確保每次實(shí)驗(yàn)前凈化系統(tǒng)至少運(yùn)轉(zhuǎn)1小時(shí)以上，同時(shí)開(kāi)啟凈化臺(tái)和紫外燈。嚴(yán)格按照操作流程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，避免因操作失誤導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或污染。

 

　　2.無(wú)菌操作：操作人員在進(jìn)入操作區(qū)域前，應(yīng)穿戴無(wú)菌工作服、口罩和手套，確保個(gè)人衛(wèi)生。在操作過(guò)程中，應(yīng)避免大幅度或快速動(dòng)作，以免攪動(dòng)空氣中的塵埃微粒。所有進(jìn)入培養(yǎng)箱的物品必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的表面消毒處理。

 

　　3.氣體管理：確保儀器內(nèi)的氣體供應(yīng)穩(wěn)定，及時(shí)更換氣體瓶和厭氧指示劑等。在操作過(guò)程中，避免在開(kāi)啟門(mén)的情況下進(jìn)行操作，以免破壞厭氧環(huán)境。定期檢查氧氣、氫氣和二氧化碳?xì)怏w濃度，避免漏氣。

 

　　4.設(shè)備維護(hù)：定期檢查儀器的各個(gè)部件，包括溫度控制器、傳感器、厭氧氣體入口、排氣閥和觀察窗等，確保它們處于良好的工作狀態(tài)。及時(shí)維修和更換損壞的部件，以保證設(shè)備的正常運(yùn)行。

 

　　5.環(huán)境監(jiān)測(cè)：定期監(jiān)測(cè)操作室內(nèi)的微生物污染情況，包括沉降菌落計(jì)數(shù)和浮游菌測(cè)定，以確保環(huán)境符合無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)。使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基進(jìn)行環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)，如胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA)，并在必要時(shí)加入中和劑，以避免假陰性結(jié)果。

 

　　通過(guò)遵循以上步驟和注意事項(xiàng)，可以最大限度地提高厭氧培養(yǎng)箱的使用效率和培養(yǎng)效果，為生物學(xué)研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。